ویژگی های ضد سرطانی و ضد میکروبی قارچ گانودرما لوسیدوم (Ganoderma lucidum)

چکیده:

گانودرما لوسیدوم یکی از غنی ترین منابع آنتی بیوتیک های طبیعی محسوب می شود و گونه های مختلف آن مانع رشد طیف وسیعی از میکرو ارگانیسم ها می شوند. خواص دارویی گانودرما لوسیدوم از جمله تقویت سیستم ایمنی و ویژگی ضد توموری آن مورد مطالعه گسترده ای قرار گرفته است. از حدود ۴۰۰۰ سال پیش در طب سنتی چین و ژاپن، گانودرما در درمان بیماری های کبدی مانند هپاتیت، نفریت (التهاب کلیه)، آرتریت (ورم مفاصل) و زخم معده مورد استفاده قرار می گرفت. همچنین اعتقاد بر این بوده است که این قارچ به عنوان یک داروی طبیعی در درمان نقص سیستم ایمنی بدن عمل می کند. به واسطه ترکیبات موثره آن، این قارچ مورد مطالعه ضد سرطانی و ضد میکروبی قرار گرفته است. هدف از این مطالعه، بررسی ویژگی های ضد سرطانی و ضد میکروبی عصاره آبی، اتانولی و متانولی گانودرما لوسیدوم می باشد. نمونه های قارچ خشک شده به شکل پودر درآمده و عصاره های آبی، اتانولی و متانولی با استفاده از دستگاه سوکسله در آزمایشگاه تهیه گردید. از رده سلول های سرطانی کبد Vero و Hep G2 در تعیین فعالیت سیتوکسیک و ضد سرطانی استفاده شده است (روش MTT). در آزمون MTT، ۵۳/۹۶ درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۱۵/۶ میکروگرم/میلی لیتر عصاره متانولی گانودرما، ۵۲/۳۸  درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۳۱/۲ میکروگرم/میلی لیتر عصاره اتانولی گانودرما و ۵۰/۷۵ درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۶۲/۵ میکروگرم/میلی لیتر عصاره آبی گانودرما لوسیدوم مشاهده شد. نتیجه گیری شد عصاره متانولی این قارچ با ۵۳/۹۶ درصد مهار سلول های سرطانی در حداقل رقت ۱۵/۶ میکروگرم/میلی لیتر در مقایسه با عصاره اتانولی و آبی بیشترین مهارکنندگی(IC 50) را از خود نشان داد.  به منظور بررسی فعالیت ضد میکروبی گانودرما لوسیدوم، باکتری های باسیلوس تورونجنسیس، میکروکوکوس لوتوس، سودوموناس فلورسانس و اشریشیاکلی به صورت تصادفی انتخاب شدند. قطر هاله عدم رشد باکتری سودوموناس فلورسانس (MTCC 103) در محیط کشت حاوی عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم در غلظت ۲۵ میکروگرم/میلی لیتر برابر با ۲۹ میلی متر بوده در حالی که قطر هاله عدم رشد باکتری اشریشیاکلی که از بیماران UTI (عفونت دستگاه ادراری) جدا شد، در همین رقت برابر با ۱۰ میلی متر اندازه گیری شد. عصاره های اتانولی و آبی کمترین تاثیر را در برابر تمامی سویه ها داشتند. در بین مطالعات، عصاره های متانولی به عنوان عامل ضد میکروبی موثرتری شناخته شد. بنابراین این قارچ خوراکی می تواند به عنوان یک عامل ضد میکروبی در تولید دارو های جدید در درمان بیماری های کبدی مورد استفاده قرار می گیرد.

مقدمه:
قارچ ها دسته ای جداگانه از یوکاریوت ها را تشکیل می دهند و متعلق به سلسله قارچان (fungi) با بازیدیوکارپ و آسکوکارپ های مشخص هستند که می توان درون خاک یا روی زمین باشد و می تواند به اندازه کافی بزرگ باشد که با چشم غیر مسلح دیده شود و با دست چیده شود. تعداد انواع مختلف قارچ های روی زمین حدود ۱۴۰۰۰۰ تخمین زده می شود. حدود ۲۰۰۰ گونه آن ها خوراکی هستند و ۲۵ گونه آن به طور عمده در مقیاس تجاری به عنوان غذا مورد استفاده قرا می گیرد. قارچ ها از این جهت که نمی توانند حرکت کنند و دارای دیواره سلولی هستند، با گیاهان شباهت دارند. دیواره سلولی قارچ ها از کیتین تشکیل شده و سلولز ندارد و در نتیجه نمی توانند فتوسنتز انجام دهند اما مواد مغذی را از محیط اطراف خود جذب می کنند.
قارچ از پیکره زایشی (Fruiting body) کلنی های قارچ بزرگتر تشکیل می شود. این ساختمان اندام تولید مثلی قارچ است که در بالای زمین رشد می کند و اسپور آزاد می کند. در نتیجه رشد اسپور، رشته های نخی شکل و منشعب میسیلیوم در زیر زمین یا در چوب تشکیل می شود. جذب مواد مغذی از محیط اطراف توسط میسیلیوم ها صورت می گیرد. جذب مواد مغذی طی دو مرحله صورت می گیرد: ابتدا میسیلیوم ها آنزیم هایی ترشح می کنند که ترکیبات موجود در گیاهان، حیوانات و اجزای موجود در خاک را به مواد قابل استفاده برای قارچ ها، گیاهان و درختان اطراف آن تجزیه می کند. سپس میسیلیوم مواد غذایی مورد نیاز برای رشد را جذب می کند.
قارچ ها بازیافت کنندگان طبیعت هم محسوب می شوند به طوری که با تجزیه ترکیبات گیاهی و حیوانی، موجب آزاد شدن کربن و سایر مواد مغذی موجود در آن ها می شوند. در اوایل بهار، قارچ ها برگ های انباشته شده را مورد حمله قرار می دهند و مواد مغذی مورد نیاز رشد گیاهان و درختان جدید را فراهم می کنند. بسیاری از قارچ ها دارای همزیستی هستند و به گیاهان در جذب مواد مغذی کمک می کنند. وقتی میسیلیوم با انشعابات شاخه مانند خود در خاک رشد می کند، مواد مغذی مانند فسفر و آب را جذب و جمع آوری می کند. سپس زمانی که میسیلیوم اطراف ریشه گیاه را فرا می گیرد و حتی وارد سلول گیاهی می شود، گیاهان می توانند به صورت مستقیم مواد مغذی جمع آوری شده را از قارچ جذب کنند. بنابراین قابلیت های گیاهان به شکل گسترده ای افزایش می یابد. در عوض، قارچ ها ترکیبات پیچیده گیاهان مانند قند ها و اسید های آمینه را جذب می کند. بنابراین هم گیاه و هم قارچ سود می برند.
قارچ ها می توانند برای سیستم ایمنی مفید باشند و مزایای زیادی را برای سلامتی انسان به ارمغان بیاورند. به طور خاص، ترکیباتی به نام هترو پلی ساکارید ها-زنجیره های بزرگ و پیچیده ای هستند که از واحد های کوچکتر مولکول قند تشکیل شدند و به طور گسترده ای به منظور خواص ایمنی و ضد توموری مورد مطالعه قرار گرفته اند. بتا گلوکان ها از جمله پلی ساکارید های موجود در قارچ هستند که به دلیل توانایی فعال سازی سیستم ایمنی به تعدیل کننده های پاسخ بیولوژیکی معروفند. همچنین گزارش شده است که این ترکیبات در کاهش کلسترول، جلوگیری از عفونت، کمک به بهبود زخم و در درمان سرطان موثر هستند.
ترکیبات کوچکتری مانند ترپن ها و استروئید ها هم در ساختار قارچ وجود دارند. تعداد زیادی پلی ساکاریدها و پروتئین های متصل به پلی ساکارید ها وجود دارند که دارای ویژگی آنتی بیوتیکی و ضد ویروسی هستند و توانایی کاهش فشار خون و کاهش سطح قند و چربی خون را دارا هستند. این ترکیبات فعال موجب شده بسیاری از قارچ ها در درمان عفونت ها، آنفولانزا، دیابت و بیماری های قلبی مفید باشند.
قارچ ها کالری کمی دارند ولی سرشار از پروتئین، کربوهیدرات و ویتامین های اساسی مانند تیامین، ریبوفلاوین، اسید اسکوربیک و مواد معدنی هستند. آن ها معمولا به عنوان غذا های عملکردی و محصولات فراسودمند هم شناخته می شوند.
قارچ ها دارای ترکیبات مختلفی هستند که مسئول بسیاری از ویژگی های بیولوژیکی آن ها محسوب می شوند از جمله این ویژگی ها می توان به خواص آنتی اکسیدانی، ضد تومور، ضد سرطان، ضد میکروبی، تقویت سیستم ایمنی، ضد التهاب و کاهش قند خون اشاره کرد.
در این میان، قارچ چینی گانودرما لوسیدوم یک قارچ دارویی عالی است که به “گیاه روح” معروف است. این قارچ در ژاپن با نام ” Reishi” و در چین با نام های ” Zing-Zhi” ، “گیاه روح” و “گیاه جان افزا” شناخته می شود. لوسیدوم (Lucidum) به معنای براق و درخشان است که به شکل ظاهری پیکره زایشی قارچ اشاره دارد که رنگی و صیقلی دیده می شود. گانودرما از حدود ۴ هزار سال پیش در طب سنتی چین و ژاپن در درمان بیماری های کبد مانند هپاتیت، نفریت، آرتریت و زخم های معده استفاده می شود. عصاره گانودرما لوسیدوم دارای اثرات آنتی اکسیدانی و ضد رادیکالی قوی می باشد که به محافظت از کبد کمک می کند. در مقایسه با گونه های دیگر گانودرما، گانودرما لوسیدوم اثربخشی بیشتری در درمان آسیب های کبدی ناشی از عوامل مختلف دارد.

گانودرما لوسیدوم

کبد یک عضو بزرگ و پیچیده است که نقش مهمی در متابولیسم کربوهیدرات ها، پروتئین ها و چربی ها دارد. مواد زائد حاصل از متابولیسم مانند آمونیاک در این محل سم زدایی می شود. کبد در تخریب بقایای گلبول قرمز و بازیافت مواد تشکیل دهنده آن به طحال کمک می کند. کبد مسئول سنتز و ترشح صفرا و همچنین سنتز لیپو پروتئین ها و پروتئین های پلاسما مانند فاکتور های انعقادی می باشد. با جذب و ذخیره گلوکز به شکل گلیکوژن (گلیکوژنز) سطح گلوکز خون را ثابت نگه می دارد و در صورت نیاز آن را به گلوکز تجزیه کرده (گلیکوژنولیز) و گلوکز را از منابع غیر کربوهیدراتی مانند اسید آمینه ها می سازد (گلوکونئوژنز). کبد نقش مهمی در سم زدایی برعهده دارد و آسیب کبد توسط عوامل مختلفی از جمله الکل ها، بسیاری از دارو ها، سوتغذیه، عفونت و کم خونی صورت می گیرد.
آسیب کبدی یک بیماری شایع است که در اغلب موارد منجر به استرس اکسیداتیو می شود و با یک سیر تکاملی از کبد چرب تا هپاتیت مزمن، فیبروز، سیروز (التهاب شدید کبد) و سرطان کبد پیش می رود. اگرچه تقریبا تمام بافت های بدن توانایی متابولیسم مواد شیمیایی را بر عهده دارند اما شبکه آندوپلاسمی صاف کبد که تحت عنوان”اتاق پاکسازی متابولیک” شناخته می شود، محل اصلی متابولیسم ترکیبات داخلی محسوب می شود. گروهی از آنزیم های واقع در شبکه آندوپلاسمی تحت عنوان سیتوکروم P-450، مهمترین دسته از آنزیم های متابولیسم کبد می باشند. سیتوکروم آخرین آنزیم از زنجیره انتقال الکترون می باشد. در پزشکی مدرن، دارو های کورتیکواستروئید ها و ضد سرطان به طور معمول در درمان بیماری کبد به شکل درمان آلوپاتیک (مبتنی بر مداخلات خارجی شامل دارو و جراحی) استفاده می شود. اما این داروها با عوارض جانبی مانند سرکوب سیستم ایمنی و تحلیل مغز استخوان هماره هستند. با این حال، تعداد زیادی دارو در سیستم سنتی پزشکی به منظور درمان بیماری های کبدی وجود دارد.

رشد سرطانی در کبد

در این مطالعه، عصاره های آبی، متانولی و اتانولی گانودرما لوسیدوم به منظور بررسی فعالیت ضد سرطانی قارچ با استفاده از رده سلول های سرطانی کبد Vero و Hep G2 انجام شد. رده های سلولی سرطان کبد در محیط آزمایشگاهی به عنوان جایگزین های سلول های کبدی اولیه مورد استفاده قرار گرفتند. این خطوط سلولی دارای طول عمر نامحدود، فنوتیپ پایدار، دسترسی بالا و کاربرد آسان هستند. محدودیت اصلی آن بیان پایین برخی از فعالیت های متابولیک در مقایسه با سلول های کبدی است. فعالیت ضد سرطان و سیتوتوکسیک عصاره های متانولی، اتانولی و آبی گانودرما لوسیدوم با استفاده از روش MTT بررسی شد.
روش MTT، آزمون مناسب، حساس، کمی و قابل اعتمادی برای تعیین تعداد سلول های زنده در محیط کشت سلولی می باشد. این آزمون رنگی براساس احیا نمک تترازولیوم ۳-(۵،۴-دی متیل-۲-تیازولیل)-۵،۲-دی فنیل-تترازولیوم برومید زرد کمرنگ به فورمازون بنفش رنگ است. واکنش احیای سلولی شامل کوفاکتور های NADH و NADPH پیریدین نوکلئوتید بوده که تنها توسط سلول های زنده کاتالیز می شود. فورمازون دارای حلالیت کمی در آب بوده و به شکل بلور های بنفش رنگ موجود است. حل شدن فورمازون در بافر موجب تشکیل محصول نهایی می شود. شدت رنگ محصول نهایی در طول موج ۶۲۰-۵۵۰ نانومتر با تعداد سلول های زنده محیط کشت متناسب است.
هدف اصلی این مطالعه تهیه عصاره های آبی، متانولی و اتانولی گانودرما لوسیدوم می باشد. به منظور بررسی فعالیت سیتوتوکسیک قارچ ها از رده سلول های Vero استفاده می شود. جهت بررسی فعالیت ضد سرطانی عصاره گانودرما لوسیدوم از رده سلول های سرطانی کبد مانند Hep G2 و همچنین جهت مطالعه ویژگی ضد میکروبی عصاره های گانودرما از روش انتشار از چاهک (Well diffusion) استفاده شد.

مواد و روش کار:

جمع آوری نمونه قارچ

۲۵۰ گرم از اندام بارده قارچ گانودرما لوسیدوم تهیه شد.

تهیه عصاره های قارچ

عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم

در آزمایشگاه، نمونه قارچ خشک شده پودر شده و در یک ظرف هوای فشرده به منظور استفاده های بعدی قرار داده شد. ۲۵ گرم از پودر گانودرما لوسیدوم به صورت جداگانه با ۲۵۰ میلی لیتر متانول در دستگاه سوکسله به مدت ۶ ساعت جهت استخراج عصاره مخلوط گردید. عمل استخراج دو بار تکرار شد. عصاره های نهایی فیلتر شده و تحت فشار کم خشک شد. عصاره های جمع آوری شده در یخچال برای آزمایشات بعد نگه داری شدند.

عصاره اتانولی گانودرما لوسیدوم

در آزمایشگاه، نمونه قارچ خشک شده پودر شده و در یک ظرف هوای فشرده به منظور استفاده های بعدی قرار داده شد. ۲۵ گرم از پودر گانودرما لوسیدوم به صورت جداگانه با ۲۵۰ میلی لیتر اتانول در دستگاه سوکسله به مدت ۶ ساعت جهت استخراج عصاره مخلوط گردید. عمل استخراج دو بار تکرار شد. عصاره های نهایی فیلتر شده و تحت فشار کم خشک شد. عصاره های جمع آوری شده در یخچال برای آزمایشات بعد نگه داری شدند.

عصاره آبی گانودرما لوسیدوم

در آزمایشگاه، نمونه قارچ خشک شده پودر شده و در یک ظرف هوای فشرده به منظور استفاده های بعدی قرار داده شد. ۲۵ گرم از پودر گانودرما لوسیدوم به صورت جداگانه با ۲۵۰ میلی لیتر آب مقطر در دستگاه سوکسله به مدت ۶ ساعت جهت استخراج عصاره مخلوط گردید. عمل استخراج دو بار تکرار شد. عصاره های نهایی فیلتر شده و تحت فشار کم خشک شد. عصاره های جمع آوری شده در یخچال برای آزمایشات بعد نگه داری شدند.

بررسی فعالیت ضد باکتریایی

برای تعیین فعالیت ضدباکتریایی گانودرما لوسیدوم، باسیلوس تورونجنسیس، میکروکوکوس لوتئوس، سودوموناس فلورسانس و ای کلای به صورت تصادفی انتخاب شدند. کلنی های باکتری جدا شده از پلیت های آگار در داخل محلول سالین استریل قرار گرفتند. لوله های آزمایش سالین حاوی محیط کشت باکتری ها در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد به مدت دو ساعت انکوبه شدند. بعد از دو ساعت انکوباسیون، لوله های آزمایش سالین حاوی محیط کشت با استاندارد مک فارلند ۰/۵ درصد مقایسه شدند. ۷/۶ گرم از محیط مولر-هینتون آگار در ۲۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل شد. آگار در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ در اتوکلاو استریل شد. بعد از استریل کردن، آگار مولر-هینتون به صورت استریل در داخل پلیت های شیشه ای ریخته شد. بعد از چند دقیقه که آگار سفت شد، به کمک سواب استریل محیط کشت باکتری بر روی سطح آگار مولر-هینتون کشیده شده و اجازه دادیم تا خشک شود. سه تا چاهک به اندازه ۱ سانتی مترتوسط میکرو پیپت استریل در فواصل یکسان از هر پلیت بریده می شود. سپس عصاره های اتانولی، متانولی و آبی گانودرما لوسیدوم برداشته می شود. ۲۵ میکرولیتر از هر عصاره به صورت استریل به هر چاهک اضافه می شود. بعد از تلقیح، پلیت ها به مدت ۲۴ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه شدند. در نهایت پس از ۲۴ ساعت، پلیت ها به منظور بررسی هاله عدم رشد بررسی شدند.

بحث و نتیجه گیری

روش MTT/ فعالیت ضد سرطانی

در روش MTT، میزان مهار سلول های سرطانی (IC50) در غلظت ۱۵/۶ میکروگرم/میلی لیتر عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم با نسبت رقیق سازی ۱ به ۳۲ با میزان جذب ۰/۳۴ برابر با ۵۳/۹۶ درصد به دست آمد.

میزان IC50 در غلظت ۳۱/۲ میکروگرم/میلی لیتر عصاره اتانولی گانودرما لوسیدوم با نسبت رقیق سازی ۱ به ۱۶ با میزان جذب ۰/۳۳ برابر با ۵۲/۳۸ درصد گزارش شد.

همچنین، IC50 در غلظت ۶۲/۵ میکروگرم/میلی لیتر عصاره آبی گانودرما لوسیدوم با نسبت رقیق سازی ۱ به ۸ با میزان جذب ۰/۳۲ برابر با ۵۰/۷۵ درصد به دست آمد.

فعالیت ضدباکتریایی

پس از ۲۴ ساعت انکوباسیون در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد،  پلیت های مولر هینتون آگار از نظر هاله عدم رشد مورد بررسی قرار گرفتند. عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم قطر هاله عدم رشدی برابر با ۲۰ میلی متر در برابر باکتری سودوموناس فلورسانس (MTCC 103) و ۱۰ میلی متر در برابر باکتری ای کلای از خود نشان داد. برای باکتری های باسیلوس تورونجنسیس (MCC 2095) و میکروکوکوس هاله عدم رشد تشکیل نشد و این نشان دهنده اثر منفی بر این باکتری ها می باشد.

در نتیجه آزمایشات ضد سرطانی و ضد میکروبی می توان نتیجه گرفت عصاره های اتانولی، متانولی و آبی قارچ گانودرما لوسیدوم دارای ترکیباتی می باشد که رشد میکروارگانیسم ها را کنترل می کند. همچنین نتایج این آزمایشات تفسیر شده و به شکل جدول، نمودار و شکل آورده شده است.

رده سلول های سرطانی که در مطالعات مورد استفاده قرار می گیرند شامل HepG2، Huh 7، HeLA، SNU – ۳۸۷، SNU -423، MC/9، Capan -1، Hep 3 –B، WCH -17، H4TG، RTH – ۱۴۹، BRL 3A و غیره می باشند. رده سلول های موجود در مطالعه حاضر که شامل Hep G2 و Vero بودند از تکثیر ویروس  هنگام انتقال HBV DNA حمایت می کنند.

جدول ۱٫ اثرات سیتوتوکسیک عصاره متانولی بر رده سلولی Vero
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۳۶ ۸۰
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۳۸ ۸۴/۴۴
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۴۰ ۸۸/۸۸
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۴۱ ۹۱/۱۱
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۴۱ ۹۱/۱۱
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۴۲ ۹۳/۳۳
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۴۲ ۹۳/۳۳
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۴۳ ۹۵/۵۵
۹ نمونه کنترل ۰/۴۵ ۱۰۰
جدول ۲٫ اثرات سیتوتوکسیک عصاره اتانولی بر رده سلولی Vero
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۳۵ ۷۷/۷۷
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۳۶ ۸۰
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۳۷ ۸۲/۲۲
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۴۰ ۸۸/۸۸
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۴۲ ۹۳/۳۳
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۴۳ ۹۵/۵۵
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۴۳ ۹۵/۵۵
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۴۴ ۹۷/۷۷
۹ نمونه کنترل ۰/۴۵ ۱۰۰
جدول ۳٫ اثرات سیتوتوکسیک عصاره آبی بر رده سلولی Vero
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۳۰ ۶۶/۶۶
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۳۱ ۶۸/۸۸
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۳۳ ۷۳/۳۳
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۳۷ ۸۲/۲۲
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۳۹ ۸۶/۶۶
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۴۱ ۹۱/۱۱
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۴۲ ۹۳/۳۳
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۴۲ ۹۳/۳۳
۹ نمونه کنترل ۰/۴۵ ۱۰۰
جدول ۴٫ اثرات ضد سرطانی عصاره متانولی بر رده سلولی HePG2
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۰۴ ۶/۳۴
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۰۷ ۱۱/۱۱
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۱۱ ۱۷/۴۶
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۱۸ ۲۸/۵۷
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۲۳ ۳۶/۵۰
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۲۹ ۴۶/۰۳
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۳۴ ۵۳/۹۶
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۴۱ ۶۵/۰۷
۹ نمونه کنترل ۰/۶۳ ۱۰۰
جدول ۵٫ اثرات ضد سرطانی عصاره اتانولی بر رده سلولی HePG2
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۰۸ ۱۲/۶۹
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۱۵ ۲۳/۸۰
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۲۱ ۳۳/۳۳
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۲۵ ۳۹/۶۸
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۲۸ ۴۴/۴۴
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۳۳ ۵۲/۳۸
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۴۰ ۶۳/۴۹
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۴۹ ۷۷/۷۷
۹ نمونه کنترل ۰/۶۳ ۱۰۰
جدول ۶٫ اثرات ضد سرطانی عصاره آبی بر رده سلولی HePG2
شماره غلظت (میکروگرم/میلی لیتر) رقت جذب درصد زنده مانی
۱ ۱۰۰۰ خالص ۰/۱۰ ۱۵/۸۷
۲ ۵۰۰ ۱/۱ ۰/۱۶ ۲۵/۳۹
۳ ۲۵۰ ۱/۲ ۰/۲۲ ۳۴/۹۲
۴ ۱۲۵ ۱/۴ ۰/۲۷ ۴۲/۸۵
۵ ۶۲/۵ ۱/۸ ۰/۳۲ ۵۰/۷۹
۶ ۳۱/۲ ۱/۱۶ ۰/۳۹ ۶۱/۹۰
۷ ۱۵/۶ ۱/۳۲ ۰/۴۴ ۶۹/۸۴
۸ ۷/۸ ۱/۶۴ ۰/۵۱ ۸۰/۹۵
۹ نمونه کنترل ۰/۶۳ ۱۰۰

اندام بارده (Fruiting bodies) گانودرما لوسیدوم

دستگاه استخراج سوکسله

پلیت میکروتیتر

 

رده سلولی HepG2

رده سلولی VERO

بررسی اثرات سیتوتوکسیک عصاره متانولی بر رده سلولی VERO

رده سلولی نرمال VERO

سمیت ۱۰۰۰μg/ml

سمیت ۶۲٫۵μg/ml

سمیت ۱۵٫۶μg/ml

سمیت ۳۱٫۲μg/ml

بررسی اثرات سیتوتوکسیک عصاره اتانولی بر رده سلولی VERO

رده سلولی نرمال VERO

سمیت ۱۰۰۰μg/ml

سمیت ۱۲۵μg/ml

سمیت ۳۱٫۲μg/ml

سمیت ۶۲٫۵μg/ml

بررسی اثرات سیتوتوکسیک عصاره آبی بر رده سلولی VERO

رده سلولی نرمال VERO

سمیت ۱۰۰۰μg/ml

سمیت ۱۲۵μg/ml

سمیت ۳۱٫۲μg/ml

سمیت ۶۲٫۵μg/ml

اثرات ضد باکتریایی عصاره های قارچ گانودرما لوسیدوم به روش انتشار در حفره

باسیلوس تورونجنسیس در محیط کشت MHA

میکروکوکوس لوتئوس در محیط کشت MHA

اشریشیاکلی در محیط کشت MHA

سودوموناس فلورسانس در محیط کشت MHA

اثرات سیتوتوکسیک عصاره متانولی بر رده سلولی VERO

اثرات سیتوتوکسیک عصاره اتانولی بر رده سلولی VERO

اثرات سیتوتوکسیک عصاره آبی بر رده سلولی VERO

اثرات ضد سرطانی عصاره متانولی بر رده سلولی HepG2

اثرات ضد سرطانی عصاره اتانولی بر رده سلولی HepG2

اثرات ضد سرطانی عصاره آبی بر رده سلولی HepG2

در روش MTT، ۵۳/۹۶ درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۱۵/۶ میکروگرم/میلی لیتر عصاره متانولی گانودرما، ۵۲/۳۸  درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۳۱/۲ میکروگرم/میلی لیتر عصاره اتانولی گانودرما و ۵۰/۷۵ درصد مهار سلول های سرطانی در غلظت ۶۲/۵ میکروگرم/میلی لیتر عصاره آبی گانودرما لوسیدوم مشاهده شد. می توان نتیجه گرفت عصاره متانولی گانودرما در حداقل غلظت ۱۵/۶ میکروگرم/میلی لیتر با IC 50 برابر با ۵۳/۹۶ درصد در مقایسه با عصاره های اتانولی و آبی بیشترین تاثیر را داشته است.

در مطالعه ضد میکروبی، عصاره های متانولی گانودرما لوسیدوم قطر هاله عدم رشدی برابر با ۲۰ میلی متر در برابر باکتری سودوموناس فلورسانس (MTCC 103) و ۱۰ میلی متر در برابر باکتری ای کلای جدا شده از بیماران UTI از خود نشان دادند. عصاره های اتانولی و آبی کمترین تاثیر را در برابر تمامی سویه ها داشتند.

از مطالعه حاضر می توان نتیجه گرفت عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم عامل ضد میکروبی مناسب و موثری می باشد. بنابراین می توان از این قارچ خوراکی به عنوان یک عامل ضد میکروبی در تولید دارو های جدید برای بیماری های کبدی استفاده کرد.

در نتیجه، ویژگی ضد سرطانی عصاره های متانولی، اتانولی و آبی گانودرما لوسیدوم به روش MTT و ویژگی ضد باکتریایی آن به روش انتشار از چاهک (well diffusion) مورد بررسی قرار گرفت. نتایج مطالعه اخیر نشان داد عصاره متانولی گانودرما لوسیدوم در مقایسه با عصاره اتانولی و آبی دارای ترکیبات فعالی می باشد که در درمان سرطان و عفونت های باکتریایی موثر می باشد.

در آینده به کمک مطالعات مولکولی و فناوری های مرتبط به آن می توان به جزئیات بیشتری در رابطه با این ترکیبات فعال دست یافت که نقش مهمی در کنترل و جلوگیری از تکثیر سلول های سرطانی و عفونت های باکتریایی ایفا می کند.

 

منبع: semanticscholar

Tags

پاسخی بگذارید

Your email address will not be published.

top